Quelle est la différence entre une plaque étalée et une plaque coulée dans une boîte de Petri ?

Lorsqu’on travaille en microbiologie, la boîte de Pétri est un outil indispensable pour la culture des micro-organismes. Deux techniques courantes pour inoculer des micro-organismes sur des boîtes de Pétri sont les méthodes sur plaque d'étalement et sur plaque de coulée. En tant que fournisseur de boîtes de Pétri, comprendre les différences entre ces deux méthodes peut vous aider à mieux guider vos clients.

Méthode de la plaque d'étalement

La méthode de la plaque d'étalement est une technique utilisée pour isoler et dénombrer les micro-organismes dans un échantillon. Dans cette méthode, un petit volume (généralement 0,1 à 0,2 ml) d’une suspension microbienne diluée est réparti uniformément sur la surface d’un milieu gélose solide dans une boîte de Pétri à l’aide d’un épandeur stérile. L'épandeur peut être une tige de verre ou un épandeur en plastique jetable.

Les étapes clés de la méthode de la plaque d’étalement sont les suivantes :

1. Préparer la plaque de gélose: Versez un milieu gélose fondu dans une boîte de Pétri et laissez-le se solidifier. Le milieu gélose doit être adapté au type de micro-organismes que vous souhaitez cultiver.
2. Diluer l'échantillon: Des dilutions en série de l'échantillon sont effectuées pour obtenir un nombre approprié de colonies sur la plaque. Ceci est important car si l’échantillon est trop concentré, les colonies seront trop nombreuses pour être comptées, et s’il est trop dilué, il se peut qu’il n’y ait aucune colonie.
3. Inoculer la plaque: A l'aide d'une pipette, transférer un petit volume de l'échantillon dilué sur la surface de la plaque de gélose. Ensuite, utilisez un épandeur stérile pour répartir l’échantillon uniformément sur toute la surface de la gélose.
4. Incuber la plaque: Placer la plaque inoculée dans un incubateur à la température appropriée à la croissance des micro-organismes. Après incubation, les colonies se développeront à la surface de la gélose et pourront être comptées et analysées.

L’un des avantages de la méthode sur plaque d’étalement est qu’elle permet l’isolement de colonies individuelles, qui peuvent être étudiées et identifiées plus en détail. Elle est également relativement simple à réaliser et ne nécessite pas d’équipement particulier. Cependant, il peut ne pas convenir aux échantillons contenant un faible nombre de micro-organismes, car le processus de dilution peut entraîner la présence de colonies sur la plaque.

Méthode de la plaque de versement

La méthode de la plaque coulée est une autre technique utilisée pour le dénombrement et l’isolement des micro-organismes. Dans cette méthode, un petit volume de l’échantillon est mélangé à un milieu gélose fondu à une température d’environ 45 à 50°C. Le mélange est ensuite versé dans une boîte de Pétri et laissé solidifier.

Les étapes clés de la méthode de la plaque de coulée sont les suivantes :

1. Préparer le milieu gélose: Faire fondre le milieu gélose et le refroidir à environ 45 - 50°C. Cette température est suffisamment élevée pour maintenir la gélose à l’état liquide mais suffisamment basse pour ne pas tuer les micro-organismes.
2. Diluer l'échantillon: Semblable à la méthode sur plaque d’étalement, des dilutions en série de l’échantillon sont effectuées pour obtenir un nombre approprié de colonies.
3. Mélanger l'échantillon avec de l'agar: Transférer un petit volume de l'échantillon dilué dans un tube contenant la gélose fondue. Mélangez soigneusement l’échantillon et la gélose en faisant tourner doucement le tube.
4. Versez le mélange dans une boîte de Pétri: Versez le mélange dans une boîte de Pétri et laissez-le se solidifier. Les micro-organismes seront intégrés dans la gélose au fur et à mesure qu’elle se solidifiera.
5. Incuber la plaque: Placer la plaque dans un incubateur à la température appropriée. Après incubation, les colonies se développeront à la fois en surface et au sein de la gélose.

La méthode de la plaque coulée présente plusieurs avantages. Il peut être utilisé pour dénombrer les micro-organismes aérobies et anaérobies, car les micro-organismes sont intégrés dans la gélose et peuvent se développer dans un environnement limité en oxygène. Il convient également aux échantillons contenant un faible nombre de micro-organismes, car l’échantillon est mélangé directement à la gélose, augmentant ainsi les chances de détecter des colonies. Cependant, la méthode sur plaque coulée peut donner lieu à des colonies plus petites que la méthode sur plaque étalée, car les micro-organismes se développent dans la gélose.

Différences entre la plaque à tartiner et la plaque à verser

1. Emplacement de la colonie: Dans la méthode sur plaque d'étalement, les colonies se développent à la surface de la gélose, tandis que dans la méthode sur plaque coulée, les colonies peuvent se développer à la fois à la surface et à l'intérieur de la gélose.
2. Taille de la colonie: Les colonies de la méthode sur plaque d'étalement sont généralement plus grandes que celles de la méthode sur plaque coulée car les micro-organismes ont plus d'espace pour se développer à la surface de la gélose.
3. Aptitude à différents micro-organismes: La méthode sur plaque d’étalement est plus adaptée aux micro-organismes aérobies, car ils ont accès à l’oxygène à la surface de la gélose. La méthode de la plaque coulée peut être utilisée pour les micro-organismes aérobies et anaérobies, car les micro-organismes intégrés peuvent se développer dans un environnement limité en oxygène.
4. Volume d'échantillon: Dans la méthode sur plaque d'étalement, un petit volume (0,1 - 0,2 ml) de l'échantillon est étalé sur la surface de la gélose. Dans la méthode de la plaque coulée, un volume légèrement plus grand de l’échantillon peut être utilisé car il est mélangé à la gélose.
5. Facilité de comptage: Les colonies sur la plaque d'étalement sont plus faciles à compter car elles sont en surface et bien séparées. Dans la plaque de coulée, compter les colonies dans la gélose peut être plus difficile.

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Références

• Atlas, RM (2010). Principes de microbiologie. McGraw-Colline.
• Pelczar, MJ, Chan, ECS et Krieg, NR (2007). Microbiologie : concepts et applications. McGraw-Colline.